机能实验报告
Ach对离体家兔小肠运动作用
摘要
目的：观察乙酰胆碱对离体家兔小肠肠肌的影响和机制。方法：将离体小肠固定在离体小肠灌流装置里，在保证各影响因素不相互干扰的情况下,分别给予家兔离体肠肌标本生理盐水（Nacl）、Ach、阿托品、阿托品+乙酰胆碱刺激，完成每次刺激并出现明显现象后用38℃的台氏液冲洗肠肌标本，观察其收缩活动的特点并记录。结果：结果显示当滴加生理盐水（Nacl）刺激离体肠肌时，张力曲线没什么变化；当用乙酰胆碱刺激离体肠肌时，张力曲线则明显上升，且频率加快；当滴加阿托品刺激时，张力曲线明显下降，且频率减慢；当滴加乙酰胆碱加上阿托品刺激时，张力曲线变化较不规则。结论：乙酰胆碱（Ach）对离体家兔肠肌有增强其运动的作用，且作用于M受体。 中文关键词：离体家兔小肠肠肌；乙酰胆碱；张力曲线 Abstract：
Objective: to observe the acetylcholine on the influence and mechanism of intestinal muscle of rabbit small intestine in vitro. Methods: in vitro small intestine in vitro intestinal perfusion device fixed, in guarantee under the condition of each influence factor does not interfere with each other, in vitro intestinal muscle specimens were given the rabbit saline (Nacl), Ach, atropine, atropine + acetylcholine stimulation, complete with 38 ℃ after each stimulus and a significant phenomenon of Taiwan's fluid colonics muscle specimens and observe the characteristics of its contraction activities and record. Results: the results showed that when add saline (Nacl) stimulation in vitro intestinal muscle, nothing change tension curve; When using the acetylcholine stimulation in vitro intestinal muscle, tension curves are obvious rise, and the frequency to speed up; When add atropine stimulation, tension curve decreased obviously, and slow frequency; When add the acetylcholine and atropine on, tension curve is irregular. Conclusion: acetylcholine (Ach) on in vitro rabbit intestinal muscle has enhanced the role of the movement, and the effects on M receptor.
[Key words]：Isolated rabbit intestinal muscle;Acetyl choline；Tension curve.
引言
消化道平滑肌与骨骼肌、心肌一样，具有肌肉组织共有的特性，如兴奋性、传导性和收缩性等。但消化道平滑肌兴奋性较低，收缩缓慢，富有伸展性，具有紧张性、自动节律性，对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等特点。给予离体肠肌以接近与在体情况的适宜环境，消化道平滑肌仍可保持良好的生理特性。Ach能激动M受体，而阿托品能阻断M受体。
1.材料和方法
1,1材料:家兔、HSS-1（B）型恒温浴槽、台氏溶液、生理盐水、Ach、阿托品、通气机、超级恒温器、张力换能器、生物信号采集处理系统 ；
1.2方法：（1）实验装置准备和仪器参数设置:把台式液在恒温器中加热并保持到38℃左右，然后在麦氏浴槽中加入一定量的38℃左右的台式液。通气管接95%O2+5%CO2混合气体。用螺丝夹调节气体管道的气体流量，调节至浴槽中气体一个个逸出为止。换能器输出线接微机生物信号处理系统，设置好相关仪器参数；
（2）离体家兔十二指肠标本制作:取家兔一只，用木槌击其头部至晕，立即剖开腹腔，找到
十二指肠，取出十二指肠，置于冰冷的氧饱和的台氏液培养皿中，沿肠壁除去肠系膜，用5ml注射器取台氏液将肠内容物冲洗干净，然后将十二指肠剪成1-2cm数小段，换以新鲜，通入95%氧气和5%二氧化碳的混合气体的台氏液备用。把十二指肠管置于有台氏液的培养皿中，然后穿线结扎2cmz左右肠肌的两端，然后把通混合气体的机制放在浴槽中一会；
（3）标本固定：肠管一端连线系于浴槽固定钩上，然后放入38℃HSS-1（B）型恒温浴槽中，再将肠管另一端系结在张力换能器的悬梁壁上，调节肌张力1.87g，在其中加入20ml的38℃的台氏液； （4）实验观察：离体肠管在浴槽中稳定适当时间后，记录一段正常张力曲线。然后滴加0.2ml的生理盐水，观察并记录其曲线张力，反应稳定换液冲洗，以此方法依次做如表1.的添加实验；
（5）数据的记录：将实验所得的一组曲线进行选择，将曲线变化明显且能够较好反应实验结果的曲线进行编辑，并记录收缩频率、幅度等值，做成文档保存并进行拷贝。
2.结果
在正常情况下，离体肠肌收缩的幅度、频率、张力、时间及间隔都相对稳定，波形没有明显的变化;加入生理盐水后，离体肠肌张力曲线没有什么变化;加入Ach后，离体肠肌张力曲线明显上升，收缩幅度减小，频率加快;加入阿托品后，离体肠肌张力曲线下降，振幅减小，频率减慢;加入乙酰胆碱和阿托品混合液后，离体肠肌张力曲线变化不规则。 2.1生理盐水对离体家兔肠肌运动的影响
2.2乙酰胆碱对离体家兔肠肌运动的影响
2.3阿托品对离体家兔肠肌运动的影响
2.4阿托品5个波后加乙酰胆碱对离体家兔肠肌运动的影响
3.讨论
3.1在恒温通气的情况下，离体小肠平滑肌能自发地有节律地进行收缩，其收缩的幅度、频率、张力、时间及间隔都相对稳定，波形没有明显的变化。在此条件下，肠段生活的环境与在体内的环境相似，所以它的表现正常；
3.2乙酰胆碱（Ach） 对离体肠运动的影响：Ach是一种神经递质，能特异性的作用于各类胆碱能受体。Ach可明显兴奋胃肠道平滑肌，使其收缩幅度、张力、蠕动增加。其作用机制是：Ach作用于十二指肠M受体，使平滑肌Ca2+通道开放，Ca2+内流，Ca2+胞浆浓度增加，平滑肌收缩加快加强。表现为收缩力变大，频率增强；
3.3 加入阿托品，曲线快速下降，收缩频率变慢，幅度减小，离体小肠活动减弱。肠道主要受副交感神经支配，小肠有一个复杂的壁内神经丛，它的终末神经元属于胆碱能，主要与运动有关，可被阿托品阻断，从而使运动受到抑制。阿托品对胆碱受体都有高度亲和力，都可
以和受体产生可逆性结合，产生竞争性拮抗作用，阿托品与受体结合后，对节后胆碱能神经支配的效应细胞上的Ｍ受体有阻断作用，所以平滑肌收缩频率和收缩张力都减小。M-胆碱受体拮抗剂，能阻断节后胆碱能神经所支配的效应器细胞上的`M受体，故可对坑Ach及拟胆碱药的M样作用。
3.4因为阿托品阻碍了Ach与M受体的作用，导致肠肌收缩的变化不规律。在实验的过程中，在滴加Ach和阿托品混合液时，离体肠肌的张力曲线没有明显的变化且不规律，有可能是因为加入的Ach和阿托品滴加顺序问题，使得两种液体没有很好的混合。
4.结论
一定浓度的Ach可以促进肠肌的运动，而且促进的作用是作用于M受体。
5.参考文献
5.1[1]陆源、林国华、杨午鸣.机能学实验教程.第2版.北京科学出版社.2010.160～1625.2[2]张志雄.生理学.第1版.上海.科学技术出版社，2009.105～111
【注】：因电脑死机导致小组实验操作数据丢失导致实验失败，故小组各自分散进入别的小组进行实验操作。本实验报告数据来自于第八组。
1.从收缩的幅度越来越小可以看出细胞的兴奋性越来越小，也可能是台氏液冲洗肠肌标本不充分，导致药品液的混合，从而刺激作用不明显；
2.适量浓度的肾上腺素和盐酸有抑制肠肌细胞兴奋的作用，适量浓度的氢氧化钠有促进其兴奋的作用。